Isolamento de Microorganismos

CULTIVO DE MICRORGANISMOS EM LABORATÓRIO

1. INOCULAÇÃO E ISOLAMENTO

1.1 INOCULAÇÃO

Semear ou inocular significa introduzir artificialmente uma quantidade de amostra (inoculo) em um meio de cultura adequado, com a finalidade de iniciar um cultivo microbiano. Após a inoculação, o meio de cultura é incubado a uma temperatura adequada para o crescimento.
A inoculação pode ser realizada em meio líquido, sólido ou semi-sólido, utilizando-se uma alça ou pipeta estéril.

Cultivo em meio líquido
Habitualmente se realiza em tubos ou em frascos de laboratório (erlenmeyers, p. ex.). O crescimento da população microbiana é evidenciado pela turvação do meio, por formação de película ou por formação de sedimento.

Fig. 1 Tubo à direita, meio BHI sem semeadura; tubo à esquerda, meio BHI após crescimento bacteriano. Observar turvação indicativa de multiplicação microbiana.

Cultivo em meio sólido
Pode ser conduzido em tubos ou em placas.
a) Tubos com ágar inclinado – Para inoculação, move-se suavemente a ponta da alça sobre a superficie do ágar com um movimento em zig-zag do fundo até a parte superior, com cuidado para não danificar (ferir) a superfície do meio.
b) Tubos com ágar não inclinado – Inocula-se introduzindo a ponta de uma alça em agulha no centro do meio.
c) Inoculação em placas de Petri – Pode ser em superficie ou em profundidade.

A inoculação em superfície pode ser realizada de duas formas:
1) Adiciona-se 0.1 mL de uma diluição da amostra com pipeta estéril no centro da placa e espalha-se com o auxílio de uma alça de Drigalski estéril.
2) Inocula-se com a alça de platina, conforme será explicado mais adiante. No item técnica de semeadura.

Inoculação em profundidade: Adiciona-se 1 mL da amostra ou uma de suas diluições no centro de uma placa de Petri vazia. Verter sobre o inóculo 20 mL de meio de cultura fundido e aquecido a 45ºC. Agitar a placa realizando movimentos circulares no