genética molecular

UNIVERSIDADE ESTADUAL DE FEIRA DE SANTANA
Departamento de Ciências biológicas
Genética Molecular I
PROFESSOR: Rogério Mercês Ferreira Santos
Aluna: Carine de Souza Silva Data: 30-09-15

ESTUDO DIRIGIDO – PCR, Sequenciamento e Tecnologia DNA recombinante

1º Técnica de multiplicação da fita de DNA. O PCR encontra sua principal aplicação em situações onde a quantidade de DNA disponível é reduzida. Em teoria, é possível amplificar qualquer DNA.
2º Para que ocorra a amplificação é necessário que prepare a reação da PCR em um tubo apropriado, com:
DNA
Prime (Sequência de DNA)
Nucleotídeos {DNTP’s que são as bases nitrogenadas (CGTA)}
TAC DNA polimerase (que ajuda na extensão da cadeia complementar)
Tampão

Passos:
1º - Desnaturação da fita dupla fita de DNA que ocorre a 95°C
2º - Anelamento dos primers que pode ocorrer em 45° a 60°
3° - Extensão: Ocorre a 72° que é a temperatura ótima de funcionamento da TAC polimerase. Nesse passo a TAC polimerase auxilia na introdução de nucleotídeos que vão complementar a cadeia que está sendo sintetizada.
Cada ciclo de uma PCR engloba três passos. Uma PCR normal tem por volta de 36 ciclos, a cada ciclo uma multiplicação excepcional da quantidade de nucleotídeos da quantidade de moléculas de DNA ( EX: 1...2...4...8...16).
3º- A PCR pode ser usada não só para amplificar sequências de moléculas de DNA, mas também permite detectar mutações em uma sequência alvo, ou mesmo detectar moléculas de DNA de organismos que não são fáceis de serem cultivados. Além disso, através desta técnica se é possível realizar comparações genotípicas entre linhagens de diferentes organismos. Por outro lado, a PCR constitui uma das técnicas mais usadas em laboratórios de pesquisas médicas e biológicas para diagnóstico de doenças hereditárias e infecciosas, testes de paternidade e na medicina forense e criação de organismos transgênicos.
4º- consiste numa série de métodos bioquímicos cuja finalidade é a determinação da ordem das bases nitrogenadas adenina,