genetica

Integração de pAN7-1 no Genoma de Magnaporthe grisea Mediada por Enzima de Restrição*
Carlos E. Marchi1, Sérgio H. Brommonschenkel1, Marisa V. de Queiroz2
& Eduardo S. G. Mizubuti1
Departamento de Fitopatologia; 2Departamento de Microbiologia, Universidade Federal de Viçosa,
CEP 36570-000, Viçosa, MG, e-mail: [e-mail]

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(Aceito para publicação em 12/05/2006)
Autor para correspondência: Sérgio H. Brommonschenkel
MARCHI, C.E., BROMMONSCHENKEL, S.H., QUEIROZ, M.V. de & MIZUBUTI, E.S.G. Integração de pAN7-1 no genoma de Magnaporthe grisea mediada por enzima de restrição. Fitopatologia Brasileira 31:254-260. 2006.
RESUMO
Visando explorar a mutagênese insercional em Magnaporthe grisea, foram avaliadas a transformação dos protoplastos obtidos após adequação do protocolo e a eficiência da integração de pAN7-1 no genoma do ascomiceto na presença da enzima de restrição Hind III. Os protoplastos de M. grisea I-22 foram prontamente transformados para a resistência à higromicina. Quando o vetor linearizado com Hind III foi usado para transformar o fungo na presença de Hind
III, a eficiência de transformação foi 1,1 a 8,1 vezes superior ao tratamento sem a adição da enzima. No geral, a melhor concentração de Hind III foi 5 unidades/reação de transformação. Tal concentração promoveu a produção média de 332 transformantes/µg de pAN7-1/107 protoplastos. A presença do gene de seleção hph no genoma de 18 indivíduos resistentes à higromicina foi confirmada por PCR.
Palavras-chave adicionais: Pyricularia grisea, P. oryzae, brusone, transformação de fungos, integração mediada por enzimas de restrição, REMI.
ABSTRACT
Integration of pan7-1 into the Magnaporthe grisea genome mediated by restriction enzyme
To investigate insertional mutagenesis in Magnaporthe grisea, we tested the transformation of protoplasts produced after protocol optimization, and analyzed the integration efficiency of pAN7-1 into the M. grisea genome mediated by the restriction endonuclease Hind III. The I-22