Genetica aula 9 e 10
Seguem as questões das aulas 9 e 10.
AULA 9 - Como o diagnóstico molecular pelo PCR, auxilia no tratamento de doenças?
A técnica de PCR (Polymerase Chain Reaction – Reação em Cadeia da Polimerase) é atualmente amplamente utilizada para o sequenciamento de genes e diagnóstico de doenças hereditárias, identificação de impressões digitais do material genético e detecção e diagnóstico de doenças infecciosas.
Por ser um método direto de alta sensibilidade, a reação em cadeia de polimerase está sendo considerada uma grande aliada na detecção de doenças infecciosas. Sua versatilidade, que permite a aplicação em diversos materiais biológicos, aliada à rapidez de análise é outro diferencial da técnica.
A técnica de PCR é um método de Biologia Molecular de amplificação do DNA e baseia-se no processo de replicação do DNA. O DNA genômico é extraído do interior das células por técnicas específicas. Após a extração, o DNA fita dupla é digerido em grandes fragmentos por meio de enzimas de restrição e quando submetido a altas temperaturas, o DNA separa-se em duas fitas simples. A este DNA desnaturado, são acrescentados, em grande quantidade, oligonucleotídeos complementares às extremidades do DNA alvo (sequência a ser amplificada) e a temperatura de reação é reduzida. Estes oligonucleotídeos, denominados primers, hibridizam-se a suas sequências complementares de DNA genômico. Os primers sinalizam onde devem dar início a síntese do DNA, que começa com a adição de desoxinucleotídeos (dNTPs) e de uma enzima DNA polimerase termorresistente, chamada Tag polimerase. Esta enzima pode entender os primers por polimerização dos dNTPs até uma temperatura de 72°C. Quando a síntese está completa, toda a mistura é aquecida ainda mais (95°C), para a fusão das dúplices de DNA recém formados. Os ciclos de síntese (resfriamento) e desnaturação (aquecimento) se repetem enquanto houver excesso de primers na mistura e a repetição dos ciclos amplifica rapidamente a seqüência de