Filtração em Gel

Relatório de Bioquímica

Separação dos componentes de uma mistura por filtração em gel

João Santos Nº 43772
Bernardo Cruz Nº 44372

RESUMO

O objetivo desta experiência foi a separação de uma mistura através de cromatografia por filtração em gel, processo que filtra discriminadamente moléculas de diferentes dimensões de uma dada amostra. A nossa amostra consistia numa solução de azul de dextrano 2000, hemoglobina e cromato de potássio. Foram recolhidas 17 porções de solução filtrada até se completar o processo de eluição. Após a recolha, foi medida a absorvância de cada uma das amostras, a 410 e 620 nm, e após análise dos gráficos das frações em função dos comprimentos de onda, foi possível determinar o valor do volume de eluição de cada um dos componentes da amostra. Concluiu-se que o composto de maior massa molecular correspondia ao azul de dextrano (volume de primeira eluição), seguindo-se a hemoglobina (segunda eluição) e por fim o cromato de potássio (cor amarela).

RESULTADOS

Após a medição do volume de eluente (Vi) na coluna, uma amostra contendo 3 componentes de diferentes dimensões (azul de dextrano, cromato de potássio e hemoglobina) foi filtrada através de uma coluna cromatográfica contendo gel (Sephadex). Após a amostra impregnar no gel, recolheram-se sucessivamente frações de 2mL de solução para tubos de ensaio, interrompendo-se o processo quando a solução recolhida se tornou incolor. Cada um dos tubos foi sujeito posteriormente a uma medição de absorvância a 410 nm e a 620 nm contra um branco de água destilada. Os resultados das absorvâncias encontram-se na tabela 1.

Fração nº
A410
A620
1
0,319
0,129
2
0,465
0,097
3
0,644
0,031
4
0,583
0,018
5
0,453
0,023
6
0,278
0,016
7
0,171
0,008
8
0,272
0,004
9
0,423
0,002
10
0,359
0,000
11
0,234
0,000
12
0,129
0,000
13
0,129
0,000
14
0,096
0,001
15
0,054
0,000
16
0,034
0,000
17
0,022
0,000

Tabela - Absorvâncias das amostras