Extração de Lectinas

Título da aula Prática: EXTRAÇÃO DE PROTEÍNAS
Código da aula: Aula Prática 01
Data de realização: / /2011
Grupos Práticos: 3

PROCEDIMENTOS
Cada grupo irá extrair proteínas de sementes vegetais.
Parte I – Obtenção da farinha da semente vegetal.
Transferir uma quantidade de sementes vegetais para um liquidificador
Triturar estas sementes até que se forme um pó fino, típico de uma farinha.
Armazenar em um frasco devidamente rotulado.

Parte II - Extração de Proteínas de Semente.
Pesar 30g de farinha de semente;
Transferir para um Becker e adicionar 150mL de tampão salina (NaCl 0,1M pH 6.8)
Agitar em agitador magnético, com auxílio de uma barra magnética por 1 hora.
Verter todo conteúdo do béquer em tubos falcon de forma a manter um equilíbrio entre os mesmos.
Centrifugar por 30 minutos, 3500rpm à 20°C e recolher o sobrenadante rico em proteínas vegetais.

Parte III – Diálise.
Após recolher o sobrenadante da centrifugação, transferir todo conteúdo para um saco de diálise.
Prender as extremidades com grampos para diálise, a fim de se evitar o vazamento do material.
Encher um béquer de 2.000mL com água destilada e acrescentar o saco de diálise dentro do mesmo
Colocar para agitar em velocidade lenta, somente para movimentação da água.
Trocar a água do reservatório (béquer) de uma em uma hora até completar 24hs
Após esse tempo, retirar a amostra do saco de diálise abrindo uma das extremidades e vertendo todo o conteúdo em um béquer.
Identificar e reservar para posterior liofilização.

Parte V – Liofilização.
Verter todo o conteúdo dialisado em erlenmeyer, dividindo o volume de 30mL por erlenmeyer.
Vedar os erlenmeyer com plástico filme, fazer pequenos furos neste plástico e identificar os erlenmeyer
Congelar o extrato em nitrogênio líquido até que os mesmos fiquem “queimando”.
Levar para liofilização, seguindo o POP (Procedimento Operacional Padrão) para utilização do equipamento que deve estar anexado ao lado do próprio