Espectrofotometria

Universidade
Instituto
Departamento de Bioquímica e Biologia Molecular
Disciplina: Biofísica

Relátorio Espectrofotometria

Discentes:

Maio/2014
Goiânia-Go
Introdução

O conhecimento da absorção de luz pela matéria é a forma mais usual de determinar a concentração de compostos presentes em solução. Grande parte dos métodos bioquímicos de análise envolve a determinação espectrofotométrica de compostos corados por reagentes cromogênios, originando um produto colorido. Os métodos que se baseiam nesse princípio são denominados métodos colorimétricos.
Um dos métodos amplamente utilizado é a espectrofotometria, a qual mede a absorção e transmissão de luz da amostra analisada, uma vez que diferentes substâncias têm diferentes padrões de absorção, a espectrofotometria permite-nos, por exemplo, identificar substâncias com base no seu espectro. Permite também quantificá-las, uma vez que a quantidade de luz absorvida está relacionada com a concentração da substância. O aparelho utilizado é chamado espectrofotômetro, é um aparelho que faz passar um feixe de luz monocromática através de uma solução, e mede a quantidade de luz que foi absorvida e a luz transmitida por essa solução. Alguns componentes são comuns a todos os espectrofotômetros, a luz, habitualmente fornecida por uma lâmpada, é fracionada pelo prisma ou rede de difração (monocromador) que separa a luz em feixes com diferentes comprimentos de onda. O comprimento de onda selecionado é dirigido para a solução contida em um recipiente transparente (cubeta). Parte da luz é absorvida e parte é transmitida. A redução da intensidade luminosa é medida pelo detector (célula fotelétrica) porque o sinal elétrico de saída do detector depende da intensidade da luz que incidiu sobre ele. O sinal elétrico amplificado e visualizado no galvanômetro em números, é lido como uma absorbância e é proporcional à concentração da substância absorvente existente na cubeta, temos a comparação da