Espectrofotometria

Sumário

1. Definição

É o método de análise óptico mais usado nas investigações biológicas e físico-químico. Baseia-se na interação (absorção e/ou emissão) da matéria com a energia radiante, ou seja, radiação eletromagnética quando os elétrons se movimentam entre níveis energéticos. A absorção da radiação luminosa acontece nos comprimentos de onda entre o ultravioleta e o infravermelho no espectro da radiação eletromagnética. Ela permite que componentes desconhecidos de uma solução possam ser identificados por seus espectros característicos ao ultravioleta, visível, ou infravermelho. Isso é possível pois um feixe de luz monocromática ao atravessa uma solução com moléculas absorventes, terá parte da luz absorvida pela solução e o restante será transmitido, assim a luz transmitida é quantificada. A absorção de luz depende basicamente da concentração das moléculas absorventes e da espessura da solução. Todas as substâncias podem absorver energia radiante, para se obter informação sobre a absorção de uma amostra, ela é inserida no caminho óptico do espectrofotômetro.
O espectrofotômetro é um instrumento que permite comparar a radiação absorvida ou transmitida por uma solução que contém uma quantidade desconhecida de soluto, e uma quantidade conhecida da mesma substância, medindo quanto de luz foi absorvida pela amostra. Todos eles possuem partes em comum, elas são: luz, cubeta, célula fotoelétrica, amplificador, etc. O espectrofotômetro funciona da seguinte forma: a luz, habitualmente fornecida por uma lâmpada, é fracionada pelo prisma ou rede de difração (monocromador) nos comprimentos de onda que a compõem (luzes monocromáticas). O comprimento de onda selecionado é dirigido para a solução contida em um recipiente transparente (cubeta). Parte da luz é absorvida e parte é transmitida. A redução da intensidade luminosa é medida pelo detector (célula fotelétrica) porque o sinal elétrico de saída do detector depende da intensidade da