Enzimas

1) Introdução
As enzimas são um grande grupo de substâncias que possuem um grande poder catalítico.
A maioria das enzimas são de origem protéica e uma pequena parte delas são constituídas de RNA
(ribozimas). Elas podem ser estímuladas, inibidas ou modificadas, e essa característica é importante para a regulação do metabolismo do organismo. As enzimas conseguem catalisar uma reação diminuindo sua energia de ativação, oque acelera a reação. Nessa prática, o nosso objetivo é medir a velocidade de uma reação catalizada pela succinato desidrogenase.
O succinato é um ácido dicarboxílico e está presente no ciclo do ácido cítrico. Ele é obtido através da conversão de succinil-CoA catalisada pela enzima succinil-CoA-sintetase (ou succinatotiocinase). Após essa conversão, o succinato é oxidado a fumarato pela succinato desidrogenase
(SDH). A SDH transfere o hidrogênio do succinato para a molécua de FAD, que está covalentemente ligada na enzima.

Nesse experimento, a molécula de FAD será substituída pelo DCIPIP (diclorofenol indofenol). O DCIPIP é um substância azulada que, conforme é reduzida, vai se tornando incolor.
Por causa dessa característica, é possível observar a atividade da succinato desidrogenase conforme a coloração da solução vai se tornando menos azul.

2) Materiais e Métodos
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Materiais

1. Pipeta (Camila)
2. Micropipeta (Camila)
3. Suporte para eppendorf
4. Eppendorf de 1,5 mL
5. Cronômetro
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Soluções utilizadas

1. Tampão-Fosfato (pH 7,4) 0,5 M

2. Triton X-100 10 mM
3. Succinato 1,0 M
4. Cianeto de Potássio (KCN) 0,2 M
5. DCIPIP (diclorofenol indofenol) 10 mM
6. Succinato desidrogenase 1 mM
7. Soluções diluídas em água de DCIPIP com 100%, 90%, 80%, 70% e 60% do volume adicionado inicialmente.
8. Água
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Métodos
A prática começou com a adição de 20 μL de solução-tampão de Fosfato (pH 7,4), 5 μL de
Triton X-100 e 2 μL de cianeto de potássio (KCN). solução-tampão serve para manter a solução numa faixa de pH