Enzima

Cromatografia de Papel Cromatografia de papel é assim chamada porque é utilizada para a separação e identificação das substâncias ou componentes da mistura a migração diferencial sobre a superfície de um papel de filtro de qualidade especial (fase estacionaria), a fase movel pode se uma mistura de solventes ou um solvente puro.
Objetivo identificar aminoácidos de um cromatograma calculando seu fator de retenção RF
Aminoácidos utilizados
Ácido glutâmico
Leucina
Lisina
Procedimentos
Cortou-se o papel filtro, utilizando uma régua faz duas margens uma superior e uma inferior marcar três pontos sobre a margem inferior nomeá-los a lápis e tocou-se com a ponta do tubo capilar, contendo a solução de cada aminoácido cada um em seu respectivo nome deixando escoar um pouco da solução. colocou-se dentro de um becker contendo n- butanol/ácido acético glacial/água tampou-se o becker deixando o solvente migrar 10 cm. Retirou-se o papel e marcou-se linha de frente do solvente. lavou-se com solução de ninidrina em acetona e levou-se à estufa por alguns segundos. Delimitou-se com lápis as manchas que aparecem no papel.
Resultados do RF
Ácido glutâmico RF= 0,31
Leucina RF=0,61
Lisina RF=0,23
A cromatografia permite a separação dos aminoácidos através do cálculo da distância de locomoção devido à reação de polaridade entre os aminoácidos e o solvente. O soluto (com aminoácido) move-se na direção do fluxo do solvente a uma velocidade que dependerá de sua atração, seja pela fase aquosa estacionária (Polar) ou pela fase solvente em movimento (Apolar). A atração do soluto pela fase orgânica (Apolar) implica uma velocidade maior de migração, em outras palavras, uma maior distância percorrida.
Após a revelação do cromatograma, medimos a distância percorrida por cada aminoácido e o RF terá o resultado da divisão entre o espaço percorrido pelo aminoácido e o espaço do solvente. Em caso de valores muito próximos de RF, para uma melhor identificação do aminoácido