eletroforese

1. Procedimento
O primeiro passo foi montar a placa para preparação do gel de acrilamida. A placa de vidro junto com a placa de plástico foram devidamente vedadas para que não houvesse vazamento do gel. Em seguida o gel de acrilamida foi preparado conforme o procedimento a seguir:
Reagentes
Volume (mL)

Gel de acrilamida
Stacking Gel
Acrilamida
2,5
1,8
Agua
4,75
5,9
Tampão do gel
1,25
0,8
SDS (1%)
1,0
1,0
TEMED
0,020
0,020
Persulfato de amônio
0,50
0,50

Colocado o gel na placa e visto a completa polimerização é preparado o stacking gel que também foi colocado na placa junto com o pente para a formação dos poços. Preparada a placa se inicia a inserção das amostras, previamente desnaturadas, nos poços, que em seguida são submetidas e uma ddp.
Quando a corrida chega ao fim o gel é cuidadosamente retirado da placa e colocado em uma solução de corante de cromassie onde fica por 30 minutos. Após a coração o gel é colocado em etanol para descorar a parte sem proteína e revelar a migração.
As imagens a seguir mostram a formação do polímero de acrilamida, que através de sua malha permite a passagem das proteínas de acordo com sua peso molecular. Proteínas com menor peso molecular terão maior facilidade em atravessar a malha do que proteínas com maior peso molecular.

Acrilamida dando origem ao monômero acrilamida

Rede de Poliacrilamida

Esse experimento é realizado com proteínas desnaturadas, usando SDS, para equilibrar a carga e poder fluir melhor no gel de acrilonitrila. Os polipeptídios ligados ao SDS colaboram para que o pH usado na análise, entre 3 e 10, não influencie no resultado.
Para a separação dos polipeptídios eles são submetidos a uma ddp que os separa em função da densidade de carga e tamanho.
As amostras usadas nesse experimento foram uma amostra padrão, uma amostra de peso molecular pequeno, uma amostra de peso molecular grande e duas amostras de sangue.
2. Resultados
A imagem a seguir mostra o