eletroforese
As Xanthomonas são bactérias responsáveis pelo cancro cítrico, doença que afeta plantas cítricas e seus aparentados, sendo uma preocupação para economia de diversos países. Isto porque a doença ocorre em plantas de grande importância comercial tais como laranja, limão, limas e outras, tendo ainda uma rápida disseminação nos pomares. Assim a busca por formas de controle e o conhecimento da bactéria são essenciais.
Há três tipos de Xanthomonas que possuem diferenças em seus perfis proteicos. Estas distinções podem ser verificadas a partir de técnicas de separação do extrato. Figura 1: Colônia de Xanthomonas em meio CCDEL
Figura 2: Laranjas afetas pelo cancro cítrico.
Separação e Purificação de proteínas
Afim de determinar a função e a estrutura de uma proteína deve-se realizar técnicas de separação e purificação que explorem as diferentes propriedades encontradas nas cadeias polipeptídica tais como, ponto isoelétrico, peso molecular e ainda a tendência de ligar-se a biomoléculas. Considerando que em uma célula (ou em um tecido) é possível encontrar vários tipos de proteínas, os métodos são executados com intuito de determinar as propriedades, composição e a sequência de aminoácido de uma em especifico. Para realizar a separação é necessário primeiramente romper a fonte proteica, ou seja, a célula microbiana (ou tecido). O rompimento é possível por meio de aquecimento, em que ocorre a liberação das proteínas em uma solução denominada, extrato bruto. A centrifugação pode ser feita em seguida afim de, preparar frações subcelulares ou ainda isolar organelas específicas.
Posteriormente, o extrato bruto é submetido a técnicas de separação e purificação específicas, como por exemplo, a eletroforese unidimensional (SDS- PAGE)
Eletroforese SDS unidimensional:
A eletroforese consiste na separação de proteínas através da migração das mesmas carregadas em campo elétrico. Não é recomendado a