EFICIÊNCIA DE DIFERENTES TÉCNICAS DE ENVASE PARA A VITRIFICAÇÃO DE EMBRIÕES MURINOS

EFICIÊNCIA DE DIFERENTES TÉCNICAS DE ENVASE PARA A VITRIFICAÇÃO DE EMBRIÕES MURINOS

PROBLEMA
Os métodos existentes de vitrificação de embriões ainda são deficientes quanto a envase?
OBJETIVO GERAL
Avaliar a eficiência da utilização do papel filtro diferentes métodos de envases de embriões murinos na vitrificação.
OBJETIVO ESPECÍFICO
Testar o uso de papel filtro e o uso de celulose para envase de embriões murinos na vitrificação.
Vitrificar embriões murinos com hastes como forma de envase(kit comercial).
Verificar o desenvolvimento embrionário in vitro após vitrificação.
Comparar as taxas de blastocistos entre os métodos propostos e o método convencional.
JUSTIFICATIVA
Um dos fatores que interfere na vitrificação de embriões é o volume do meio crioprotetor no momento do envase. Quanto menor o volume do meio crioprotetor mais rapida sera a taxa de resfriamento e consequentemente o sucesso da vitrificação. Assim este estudo pretende avaliar a eficiência de métodos que possam diminuir o volume de envase e facilitar a tecnica favorecendo a sobrevivência embrionária.
METODOLOGIA
Para este estudo serão utilizadas 30 fêmeas de camundongo (C57bl/6 x Swiss) F1, mantidas a temperatura de 22 + 2°C e ciclo de luz 12/12h (claro/escuro) e com quatro semanas de idade, serão superovuladas com administração intraperitoneal de 10 IU eCG (Gonadotrofina Coriônica equina – Novormon®) e após 48h com 10 IU hCG (Gonadotrofina Coriônica humana - Vetecor®) .Após a injeção de hCG, as fêmeas serão colocadas com machos durante a noite e na manhã do dia seguinte após observada a presença do tampão vaginal, indicativo de cópula, este dia será considerado o 1° dia da prenhez. No 3° dia os pré-embriões serão lavados da tuba uterina em meio HTF-Hepes (human tube fluid – Life Global® ) Suplementando com 10% de soro fetal bovino (SFB). Embriões serão selecionados utilizando-se como critério de