Determinação do ponto isoelétrico da caseína

Determinação do ponto isoelétrico da caseína: PRÁTICA 5

Os objetivos da aula foram: reconhecer as proteínas como moléculas eletricamente carregadas e analisar a influência do pH sobre a distribuição dessas cargas.

O procedimento experimental foi dividido em 3 etapas:
1. Extração da caseína do leite
2. Preparo de uma solução de caseína
3. Determinação do ponto isoelétrico da caseína

1º) Extração da caseína do leite
Material utilizado:
Reagentes e soluções:
- leite
- solução de ácido acético (CH3COOH) 2M
- etanol (CH3CH2OH) 95% (v/v)
- éter etílico (CH3CH2OCH3CH2)

Vidraria e instrumental:
- béquer de 250 mL
- proveta de 100 mL
- conta-gotas
- funil e papel de filtro

Procedimento:
1. Aquecer 150 mL de água destilada a 38ºC;
2. Adicionar 50 mL de leite e misturar bem;
3. À solução acima, gotejar a solução de ácido acético, até o aparecimento de um precipitado abundante (aproximadamente 0,7 mL do ácido);
4. Deixar descansando durante, aproximadamente, 20 minutos para sedimentação da proteína;
5. Separar o sobrenadante por decantação;
6. Ao precipitado, adicionar 20 mL de etanol e misturar bem;
7. Filtrar (ou, se possível, centrifugar) e desprezar o filtrado (só interessa o precipitado);
8. Adicionar, ao precipitado, 5 mL de éter etílico e misturar;
9. Decantar o sobrenadante e secar o precipitado (caseína) em papel de filtro.

Preparo das Soluções:
- Solução de Etanol:
20 mL de etanol a 95% (v/v)
95 mL 100 mL X 60 mL X= 57 mL de etanol Obs: 20 mL para cada equipe

- Solução de Ácido Acético de 2 M:
CH3COOH 2 mol 120g 1000 mL
M= 60 x 100 mL X = 12g 11 mol 60 2 mol 120 g