Determinação de polimorfismos no gene eca e genotipagem por high resolution melting (hrm) dos genes myh7 exão 8 e mybpc3 exão 23

Determinação de polimorfismos no gene ECA e Genotipagem por High Resolution Melting (HRM) dos genes MYH7 exão 8 e MYBPC3 exão 23

ABSTRACT
Este trabalho teve como objectivo a determinação do polimorfismo I/D da ECA (Angiotensin Converting Enzyme) e sequenciação do gene MYBPC3 exão 7 (Myosin Binding Prontein C), para o estudo de uma das principais causas da Cardiomiopatia hipertrófica, espessamento anormal do septo interventricular. Para tal, procedeu-se a realização de uma electroforese em gel de agarose e sequenciação por PCR a fim de observar os resultados.
Para a genotipagem dos genes MYBPC3_ex23 e MYH7_Ex8, recorreu-se ao método de HRM, que se considera um método inovador, rápido e de alta precisão para a determinação de mutações. A partir deste método obtiveram-se vários gráficos com curvas e picos de melting, curvas normalizadas, mas, no geral, estes foram inconclusivos.

Palavras-chave: Polimorfismo I/D; ECA; MYBPC3_Ex7; Cardiomiopatia hipertrófica; HRM; PCR; MYBPC3_ex23; MYH7_Ex8

INTRODUÇÃO
O DNA, ácido desoxirribonucleico, é uma macromolécula polimérica que contém informação genética, sendo cada unidade monomérica, o nucleótido, composto por uma desoxirribose (ose ou açúcar), um grupo fosfato e uma base azotada (purinas e pirimidinas). As purinas são a adenina e a guanina e as pirimidinas a timina e a citosina. Os nucleótidos que formam a cadeia polinucleotídica ligam-se entre si por ligações covalentes – ligações fosfodiestéricas – entre o grupo fosfato de um nucleótido e o grupo OH-3’ da desoxirribose do nucleótido seguinte. [1] As duas hélices são mantidas juntas por pontes de hidrogénio, nas quais dois átomos electronegativos compartilham um protão entre as bases. [2]

Extracção do DNA
O método de extracção de DNA é compreendido pela: lise das membranas celulares, desnaturação das proteínas histonas e inactivação das nucleases, porém, não permite a separação completa dos diferentes ácidos nucleicos, DNA e RNA. Deste modo, a solução de