CONCEITOS DE BIOLOGIA CELULAR

CONCEITOS DE
BIOLOGIA MOLECULAR

Jorge Mondego

Biologia Molecular

Genome

Transcriptome

The “OME”-Era

Proteome

Metabolome

- Entendimento da fisiologia e reprodução de microorganismos
- Entendimento dos mecanismos de replicação, transcrição e tradução
- Enzimas de restrição
- Plasmídeos
- Purificação de proteínas e Enzimologia
- Polymerase Chain Reaction (PCR)
- Transcriptase reversa e RT-PCR
- Sequenciamento
- Fluoróforos
- Automação

Plasmídeos

Cromossomo bacteriano

Plasmídeos

DNA extracromossômico capaz de se replicar independentemente da replicação cromossomal
- Resistência a antibióticos
- Produção de toxinas
- Conjugação (transmissão de material genético entre as bactérias)
- Origem de replicação própria

Transferência horizontal de genes
Conjugação
Transmissão de material genético entre as bactérias

Transferência de material genético entre reinos
Agrobacterium tumefaciens

Transformação
Competência – Habilidade de uma célula receber DNA extracelular vindo do meio ambiente.
-Natural: Bactérias adquirem DNA do meio para nutrição, reprodução e reparo de seu DNA, através de mecanismo de transporte membranar. - Artificial: Uso de procedimentos de laboratório que tornam as células passíveis de serem transformadas.

Transdução

Fagos – vírus que infectam bactérias

Enzimas de restrição (endonucleases)
Daniel Nathans, Werner Arber, Hamilton Smith - 1978

Sistema de modificação - restrição
- Enzimas bacterianas que reconhecem e clivam DNA invasor
- Reconhecimento de seqüência palindrômica de DNA exógeno
- Seqüências bacterianas equivalentes são metiladas

Seqüência palindrômica

5'-GTATAC-3'
||||||
3'-CATATG-5'

Pontas coesivas
Cohesive ends

Pontas “cegas”
Blunt ends

Manipulação dos plasmídeos e a tecnologia do DNA recombinante

Sítio de clonagem Resistência a antibióticos

Origem de replicação

“Clonagem” em vetores
-Plasmídeo é digerido com