Coloração de Gram Procedimentos

Procedimento Experimental de Determinação de Gram
Com todos os materiais sobre a bancada inicia-se pelo processo de esterilização da alça de platina sobre o bico de bulsen, para esterilizá-la deve-se segura-la da mesma forma como se segura uma caneta, e rodá-la em cima do bico de bulsen para que o fogo percorra toda sua extensão, depois deve-se incliná-la aproximadamente 45º e esperar que ela fique incandescente; após a esterilização a alça de platina deve ficar apoiada no bico de bulsen para que ela não saia da área de proteção do mesmo.

Tudo que for pego com a mão direita ou esquerda deve-se permanecer neste mesmo lado, visto que a troca de objetos de uma mão para a outra pode ocasionar acidentes devido ao risco que o bico de bulsen apresenta por se tratar de um emissor de chama.

Manuseando na área de segurança, pega-se o tubo de ensaio, retira-se o algodão que esta tampando-o e com um conta gotas coleta-se a salina que está no tubo; esta salina deve ser pingada (uma gota) na lâmina que vai ao microscópio; no final deste procedimento deve-se passar o tubo de ensaio no bico de bulsen e tampá-lo novamente com algodão.

Segurando de maneira leve a alça de platina, deve se abrir a placa de Patrick e esfregar a alça nela superficialmente para que possa ser retirada uma finíssima camada de microrganismos que ali cresceram; tampa-se novamente a placa e realiza-se um esfregaço desta camada na lâmina que contem a salina.

Com o bico de bulsen aceso, e com um prendedor segurando a lamina, realiza-se a secagem da placa de maneira lenta, sem que ela corra risco de estourar.

Após a secagem foi realizado o processo de coloração; para corar devem-se realizar os seguintes passos:

Pingar o cristal violeta e esperar um minuto

Sobre ele pingar lugol e esperar mais um minuto,

Colocar solução de álcool – cetona e lavar com água,

Cobrir com Fucsina e esperar 30 segundos

Lavar e deixar secar.

As bactérias que tiverem a característica irão formar cristais