COLORAÇÃO BACTERIANA

Faculdade de Farmácia da Universidade de Coimbra
Laboratório de Microbiologia

Disciplina: Microbiologia Geral

Trabalho Nº 2: Coloração de Gram

Objectivos:
- Aprender a preparar e interpretar uma coloração de Gram
-Identificar a morfologia, tipo de agrupamento e reacção à coloração de Gram de várias espécies bacterianas - Identificar factores que alteram os resultados da coloração de Gram

Introdução:
A técnica de Gram é uma coloração diferencial, isto é, a capacidade entre várias bactérias da retenção de alguns corantes. Na coloração de Gram algumas bactérias resistem à descoloração por um maior período de tempo que outras.
Na coloração de Gram o corante primário, o violeta de genciana, é aplicado a um esfregaço bacteriano. Aplica-se de seguida o mordente, soluto de Lugol, uma substância que intensifica a reacção entre a célula e o corante. O diferenciador (solução alcool-acetona) é usado para descorar algumas células. As bactérias Gram-negativo descoram mais rapidamente que as Gram-positivo. O tempo de actuação do diferenciador é essencial para a obtenção de uma boa coloração. Após lavagem com água as bactérias que descoraram no passo anterior são coradas com o corante de contraste de côr rosa, fucsina de Ziehl diluída ou safranina. No final, as células coradas de roxo são designadas de Gram-positivo e as coradas de rosa, de Gram-negativo.
A técnica de Gram é uma forma rápida e fácil de avaliar a estrutura da parede celular bacteriana. As paredes celulares das bactérias Gram-positivo são estruturalmente diferentes das de Gram-negativo.
As células Gram-positivo apresentam uma camada de peptidoglicano mais espessa, enquanto que, nas bactérias Gram-negativo a camada é mais fina e apresenta uma membrana externa.
A natureza química da parede celular bacteriana é o factor predominante do resultado da coloração de Gram. Células velhas ou que tenham sido submetidas a factores físico ou químicos que comprometam a integridade da parede