coloraçao de gram

Observação de bactérias usando a coloração de Gram / Guião Prático Objectivo
Pretende-se que os alunos classifiquem as bactérias existentes no iogurte segundo o tipo de Gram. Para tal, irão realizar uma coloração diferencial segundo a composição química das paredes celulares das bactérias. Enquadramento
Esta actividade laboratorial enquadra-se no estudo da unidade 8 - "Sistemática dos seres vivos", do programa da disciplina de Biologia e Geologia. Actividade
Coloração de Gram
Proposta por C. Gram em 1884, esta técnica permite distinguir células bacterianas quanto à composição das suas paredes celulares, facilitando a observação morfológica das próprias células. Em termos físico-químicos, o processo baseia-se na reacção de um corante alcalino com os ácidos da célula. Por adição de lugol (solução de iodo) forma-se um complexo que, quando se aplica o álcool, desaparece ou é retido, consoante a diferente sensibilidade das paredes celulares. Torna-se assim possível distinguir entre bactérias Gram positivas (Gram +) e Gram negativas

(Gram -), consoante a cor final que as células tomam. Esta coloração é um dos critérios fundamentais usados em taxonomia bacteriana, pois esta diferença de comportamento é atribuída a diferenças na composição da parede celular.

Tempo de execução: 15 minutos (esfregaço + coloração) sensivelmente.

Material necessário
- Iogurte
- Lâminas
- Ansa de inoculação
- Conta-gotas
- Água destilada
- Luvas
- Solução de violeta de cristal
- Solução de Lugol
- Álcool etílico (96%)
- Solução de safranina
- Microscópio óptico
- Óleo de imersão Procedimento
1- Coloque uma gota de água na lâmina
2- Com uma ansa de inoculação, torne homogéneo o iogurte e retire uma gota. Espalhe-a na lâmina, sob a gota de água, para formar o esfregaço.

3- Seque o esfregaço ao ar durante alguns minutos.

4- Efectue a coloração de Gram, tendo em conta os pontos seguintes:
Cubra o esfregaço com violeta de cristal