Coloracao de gram

Hans Christian Joachim Gram (1853 - 1838), em 1884, o médico dinamarquês desenvolveu um método de coloração de bactérias ,que consiste no tratamento sucessivo de um esfregaço bacteriano ,fixado pelo calor ,com os reagentes cristal violeta ,lugol ,etanol-acetona e fucsina .Essa técnica permite a separação de amostras bacterianas em Gram-positivas e Gram-negativas e a determinação da morfologia e do tamanho das amostras analisada, baseado na capacidade das paredes celulares de bactérias Gram-positivas de reterem o corante cristal violeta no citoplasma durante um tratamento com etanol-acetona enquanto que as paredes celulares de bactérias Gram-negativas não o fazem.

O método consiste no tratamento de uma amostra de uma cultura bacteriana crescida em meio sólido ou líquido; com um

(1) corante primário, o cristal violeta,deixando durante 1 minuto ,(2)seguido de tratamento com um fixador, o lugol, durante 1 minuto.Tanto bactérias Gram-positivas quanto Gram-negativas absorvem de maneira idêntica o corante primário e o fixador, adquirindo uma coloração violeta devido à formação de um complexo cristal violeta-iodo, insolúvel, em seus citoplasmas,(3) segue-se um tratamento com um solvente orgânico, o etanol-acetona ate que não escorra mais o cristal violeta.O solvente dissolve a porção lipídica das membranas externas das bactérias Gram-negativas e o complexo cristal violeta-iodo é removido, descorando as células. La Por outro lado, o solvente desidrata as espessas paredes celulares das bactérias Gram-positivas e provoca a contração dos poros do peptidoglicano, tornando-as impermeáveis ao complexo; o corante primário é retido e as células permanecem coradas. A etapa da descoloração é crítica, pois a exposição prolongada ao solvente irá provocar a remoção do cristal violeta dos dois tipos de bactérias, podendo produzir resultado falsos.(4) Adiante lavando com água corrente, em seguida amostra é tratada com um corante secundário, a fucsina diluída 1/10