bromatologia- aula fibras

Reagentes
- Etanol 95% (v/v)
- Etanol 78% (v/v)
- Acetona
- Tampão fosfato 0,08M, pH 6,0
- Solução de hidróxido de sódio (NaOH) 0,275N
- Solução de ácido clorídrico (HCl) 0,325M
- TDF-100A Kit – Total Dietary Fiber Assay Kit (Sigma) – contendo as três enzimas necessárias à digestão enzimática da amostra (-amilase termostável, protease e amiloglucosidase)
- Celite C-211, com lavagem ácida (Sigma).
Procedimento
O procedimento efectuado incluiu as etapas indicadas na figura 4, a seguir descritas. Digestão enzimática:
Pesou-se, em duplicado, 1g de amostra seca e moída, com a aproximação de
0,1 mg, que se transferiu para um copo de 400 mL ao qual se adicionou 50 de tampão fosfato (pH 6,0). Ajustou-se, sempre que necessário, o valor de pH a 6,0 ± 0,2.
Adicionou-se 0,1 mL de α-amilase termoestável. Em seguida os copos foram tapados com folha de alumínio e colocados num banho de água termostatizado (Kotterman) a uma temperatura entre os 95ºC e 100ºC durante 30 minutos, com agitação a cada 5 minutos. Após arrefecimento, até à temperatura ambiente, procedeu-se ao ajuste do valor de pH a 7,5 ± 0,2 por adição da solução de NaOH 0,275N e adicionou-se 0,1 mL a solução de protease previamente preparada (100µL de uma solução a 5% (m/v) de protease em tampão fosfato). Tapou-se novamente os copos com folha de alumínio e incubou-se durante 30 minutos a 60ºC com agitação contínua.
Arrefeceu-se a solução, adicionou-se 10 mL da solução de HCl (0,325M) e mediu-se o pH, tendo sido feito o ajuste de modo ao pH final ser 4,0-4,6. Adicionou-se
0,3 mL de amiloglucosidase, tapou-se os copos com folha de alumínio e incubou-se durante 30 minutos a 60ºC, com agitação contínua.
Procedimento
O procedimento efectuado incluiu as etapas indicadas na figura 4, a seguir descritas. Digestão enzimática:
Pesou-se, em duplicado, 1g de amostra seca e moída, com a aproximação de
0,1 mg, que se transferiu para um copo de 400 mL ao