Bioquímica sds

RELATÓRIO:

SDS - PAGE

Questões

1. Construa um gráfico do logaritmo do PM das proteínas do padrão em função da mobilidade eletroforética (em cm) e utilize este gráfico para determinar o PM da albumina.

[pic] Figura 1. Gel com as medidas registradas

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Observando-se que a mobilidade da albumina foi de 3 cm, um valor entre o valor da ovoalbumina e da albumina bovina, supõe-se que seu PM estará entre 76.000 e 52.000.
Aplicando-se a equação da reta observada no gráfico no valor observado para a mobilidade eletroforética da albumina, tem-se:

y = -0,1529x + 5,3576 y = -0,1529 (3) + 5,3576 y = 4,90
Log de PM = 4,90
PM = 79.433

Esse valor não está entre os valores esperados. Essa discrepância se dá especialmente a erros experimentais e de leitura das mobilidades no gel.

2. Qual é a direção da migração das proteínas no gel? Por quê? Qual a função dos seguintes reagentes na técnica de SDS – PAGE?

a) SDS b) Glicerol e β - mercaptoetanol (tampão de amostra) c) Ácido acético (coloração do gel)

A direção da migração das proteínas no gel na técnica de SDS PAGE é para o polo positivo. Isto se deve ao fato de que o SDS confere carga negativa a todas as amostras, daí elas migram por diferença de polaridade, na direção do polo positivo. Já a velocidade com que as amostras migram vai depender das massas moleculares.
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Figura 2. Direção da migração das amostras na técnica SDS PAGE.

a) O SDS (sódio dodecil sulfato) é um agente desnaturante, um detergente fortemente aniônico. Além de desnaturar as proteínas, o SDS liga-se às cadeias polipeptídicas, cobrindo-as com cargas negativas. Desta forma, a carga intrínseca proteica é mascarada e todas as proteínas da amostra migram na mesma direção (polo positivo) quando submetidas ao campo elétrico, com velocidade de migração dependente da massa molecular.

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Figura 3. O SDS é um agente desnaturante