Bioqu Mica Geral A

Bioquímica Geral A
Grupo:2 p.4
Ângela Dente nº45282
Bárbara Figueiredo nº45559
Kivénia Ferreira nº46355
Maria Carolina Ferreira nº45564
Mariana Ferreira nº44932

Perguntas de preparação para a prática
1. I= ½.  Ci. (Zi)2
I= ½ [1.(-1)2 + 1.(+1)2] = 1 M (solução tampão B)
A solução tampão B terá uma maior força iónica que o tampão A, pois apresenta uma maior concentração de cloreto de sódio. pH= pka + log [ [A-] / [HA] ] ph= 4,7 + log [(0,020)/ (0,05)] = 5,3 (tampão A e B)
2. A cromatografia de permuta iónica é um método de separação de proteínas que se baseia na diferença de carga destas a determinado pH do meio.
3. Como a resina DEAE-C é aniónica, ou seja, atrai aniões, e sabendo que a pH acima do seu pI as proteínas têm carga negativa, podemos então concluir que a banda verde, a catálase, tem o pI abaixo do pH do meio, enquanto o citocromo c, carregado positivamente a pH=5,3, terá um pI acima deste valor.
4. Um método alternativo para eluir a catalase mantendo a força iónica constante consiste em baixar o pH da solução tampão até que este fique inferior ao ponto isoelétrico da proteína (pH <5). Ocorre assim, um aumento da concentração de H+ provocando uma diminuição da carga negativa na catalase eluindo mais facilmente, pois não fica atraída pela resina carregada positivamente.

Gráficos de absorvância a 280 nm em função das frações

1. Considerando que a absorvância é próxima de 0 nas frações 1 e 3 e aumenta exponencialmente na fração 2, podemos concluir que a separação foi eficiente. No entanto, como se pode notar, na primeira separação, a do citocromo c, a fração 1 tem um valor de absorvância mais elevado do que seria de esperar, o que nos leva a concluir que a separação foi mais eficiente na catálase do que no citocromo c.

Tabela com os picos de absorvância na região do visível
Picos de absorvância
Citocromo c
Catalase

Absorvância
C.d.o.

Absorvância
C.d.o.
1º
0,319
416,1nm
1º
0,245
413,7nm
2º
0,070
550,2nm
2º
0,063
550,5nm
Comparando os valores