Biologia

EXTRAÇÃO DE ACIDOS NUCLEICOS * Ruptura da parede celular (células vegetais) e membrana plasmática (todas as células); * Extração de proteínas. Com a ruptura da membrana plasmática, saem para o meio extracelular todos os componentes intracelulares como o DNA ,RNA, proteínas, polissacarídeos e organelas; * Precipitação do DNA em solução aquosa com agente desidratantes (sais e álcoois); * Degradação do RNA residual. O RNA restante nas amostras de DNA gnômico pode ser eliminado pela ação de ribonucleases (RNAses) que o degradam.
REAÇÃO DE POLIMERASE EM CADEIA (PCR) * É uma metodologia que pode ser executada inteiramente “in vitro” sem o uso de células; * A PCR possibilita a síntese de fragmentos de DNA, usando a enzima DNA-polimerase, a mesma que participa da replicação do material genético nas células; * É realizada em três etapas fundamentais: a desnaturação da dupla fita do DNA, hibridação de oligonucleotideos iniciadores e polimerização das novas cadeias de DNA;
ELETROFORESE EM GEL * É uma técnica baseada no fato da molécula de DNA possuir carga negativa em valores de pH neutro ou alcalino e consequentemente, quando aplicado ou imerso em uma matriz de gel submetida a um campo elétrico, migra em direção ao polo positivo (anôdo); * A velocidade da migração depende do tamanho da molécula. Por isso em um dado momento da eletroforese moléculas de tamanhos distintos se encontram em diferentes pontos da matriz;
SISTEMAS DE RESTRIÇÃO E METILAÇÃO * Esse sistema é operado por enzimas de restrição e metilases; * As enzimas de restrição são proteínas que reconhecem e cortam o DNA em pontos específicos; * As enzimas de restrição são produzidas por bactérias para restringir a proliferação de vírus invasores e ajudam a detectar a presença de diferentes formas de determinados germes;
ENZIMAS MODIFICADORAS * As enzimas modificadoras catalisam reações que modificam moléculas de DNA pela remoção ou adição de grupos químicos