AVALIAçãO DA CINéTICA ENZIMáTICA DA INVERTASE

1. OBJETIVO
O objetivo desta prática é estudar a cinética enzimática na invertase no substrato da sacarose e assim, determinar a velocidade.

2. INTRODUÇAO
A enzima sacarase ou invertase (β-fructofuranosidase) é uma enzima que catalisa a hidrólise da sacarose (açúcar não redutor) em glucose e frutose (dois açúcares redutores).

Sacarose + H2O - Glucose + Frutose

Na reação, 1 unidade (U) de invertase hidrolisa 1 µmol de sacarose a glucose e frutose por minuto, a pH 4,6 (25ºC). A reação segue determinando a quantidade de açúcares redutores libertados por ação da enzima, utilizando, a reação do ácido 3,5- dinitrosalicílico (DNS) e espectrofotometria. Na presença de um açúcar redutor, o DNS, é reduzido a 3-amino-5-nitrosalicílico, e apresenta uma cor laranja avermelhado. Através do espectrofotômetro é possível calcular a concentração do açúcar redutor por intermédio de um gráfico de ajuste linear que relaciona as duas grandezas. A concentração do substrato que produz metade da velocidade máxima é a constante de Michaelis-Menten ou Km, a qual é característica para cada enzima, agindo sobre um dado substrato. A equação de Michaelis-Menten relaciona a velocidade inicial de uma reação enzimática com a concentração de substrato e a Vmáx através da constante de Km (ALMEIDA, 2003).
O açúcar invertido tem aplicação em vários processos industriais, possuindo maior valor agregado que a sacarose, aumentando a viabilidade econômica do processo de produção da mesma (ALMEIDA, 2003).

3. RESULTADOS
Através da técnica obtivemos os seguintes resultados:
Tubo (n°)
[S] a (mM ou μM)
[ ] de açúcar redutor doseado (mM)
[ ] de sacarose hidrolisada(mM)b
V c (μM/min)
1/[S]
1/V
1
0,05
0,0853
0,04265
42,65
20
0,023
2
0,1
0,1063
0,05315
53,15
10
0,018
3
0,25
0,1633
0,08165
81,65
4
0,012
4
0,5
0,2033
0,10165
101,65
2
0,009
5
1
0,2633
0,13165
131,65
1
0,007

A [ ] de açúcar redutor doseado é obtida através da equação (y=0,795x- 0,0599) resultado da prática anterior, conforme gráfico abaixo.