Aula Preparacao do Teste de Allium cepa

Preparação do Teste Allium cepa

INTRODUÇÃO

A Genotoxicidade é a área da genética que estuda osprocessos que alteram a base genética da vida (DNA),processo este classificado de mutagênese. A genotoxicidade é uma especialidade relativamenterecente, e se situa na interface entre toxicologia egenética, por isso denominada, frequentemente, de genética toxicológica. A utilização de Allium cepa L. (cebola comum) tem sidorecomendada para análises de genotoxicidade em efluentes devido a sua elevadasensibilidade, baixo custo, rapidez, facilidade demanipulação e da utilização de amostras sem tratamentoprévio, determinando-se a diminuição do índice mitótico e aformação de aberrações cromossômicas. Sendo utilizado rotineiramente em todo omundo em laboratórios que trabalham com testes de genéticatoxicológica, considerado uma ferramenta valiosa quanto àdeterminação da contaminação ambiental, havendo extensobanco de dados de substâncias químicas já testadas.

OBJETIVOS
Otimizar o teste de Allium cepa para estudos em mutagênese
Conhecer melhor a dinâmica da mitose e as estruturas cromossômicas em cada fase mitótica

MATERIAIS
100mLÁgua deionizada
01 Becker
01 Cebola
02 Lâminas para bisturi
01 Lâmina para microscopia
01 Lamínula
01 Óleo de imersão (5mL)
Microscópio ótico
30mLSolução de Carnoy (3 álcool etílico: 1 ácido acético)
30mLÁcido Clorídrico (1N)
02 Pipetas pasteur
01 Pinça
Papel absorvente
Orceína acética (2%)

PROCEDIMENTOS
01. O bulbo deve ser colocado para germinar no Becker, com a parte inferiormergulhada na solução (ex. água deionizada).
02. Após uma semana, as raízesserão coletadas para análise de anomalias em mitose e micronúcleos quandoatingirem o tamanho de 0,5 a 2,0 cm, em número de 3 por bulbo, e fixadasimediatamente em Solução Carnoy (3 partes de etanol e uma parte de ácido acético).
03. As raízespermanecerão no fixador durante 20 minutos. Após a fixação, seram realizadosos preparados histológicos segundo as seguintes etapas: (a) lavagem das raízesem água