Apresentação BM modulo II

Iolanda Travassos nº 34504
Turno P.4, Grupo V

Objectivo:
- Extracção e isolamento de DNA das células epiteliais da boca. -

Aplicação das técnicas de PCR para amplificar o gene
TAS2R38 e de RFLP para detectar o polimorfismo.

Isolamento e extracção do DNA

Métodos

PCR

RFLP

Extracção com a zaragatoa células epiteliais

-Solução lise (Tris
HCl e SDS)
-Solução de protease
-NaCl e isopropanol
-TE com RNase

DNA template, 2 primers,
DNA Taq polimerase, dNTP’s,
MgSO4 , tampão, água. 30 ciclos Enzima de restrição Hae III

Espectrofotometria e electroforese

Electroforese

Electroforese

Sequência do gene:

Primer reverse:

AGGTTGGCTTGGTTTGCAATCATC

Ligação dos primer’s:

Polimorfismo:

Espectrofotometria:
Amostra

A 230

A 260

A 280

A 320

[DNA] (ug/mL)

A 260/ A 280

A 260/ A 230

1

0,145

0,008

0,012

0,003

80

0,67

0,06

2

0,138

0,020

0,021

0,013

210

0,95

3

0,142

0,017

0,023

0,011

170

0,74

Electroforese:
1

Marcador de peso molecular:
Hyperladder I

2

DNA degradado 3

1

2 0,14
3
0,12

DNA cromossómico Electroforese PCR:
Controlo negativo

Marcador de peso molecular: Hyperladder IV

221 pb

São todos heterozigótico: 3 bandas

Electroforese RFLP:

200 pb

177 pb

221 pb
44 pb
22 pb

Estatística
Resultados do turno P2
1

2

3

4

5

6

7

Turnos

Heterozigóticos

Homo taster

Homo nontaster

1

1

1

0

0

2

5

1

2

2

3

3

1

0

2

4

221 pb

Amostras

7

7

0

0

16

10

2

4

100%

62,5%

12,5%

25%

44 pb Total
Percentagem

171 pb

44 pb

Marcador de peso molecular: Hyperladder IV (1,7)
Homozigótico não taster (2,3)
Heterozigótico (4)
Homozigóticos taster (5,6)

 Em todas as nossas amostras verificamos que conseguimos extrair e isolar o DNA, tendo a Rnase e a protease