Análise, reconhecimento e clonagem virtual de orf

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Universidade Federal do Paraná

Setor de Tecnologia

Curso de Engenharia de Bioprocessos e Biotecnologia

Análise, Reconhecimento e clonagem virtual de ORF

Curitiba

2010

Universidade Federal do Paraná
Setor de Ciências Biológicas
Departamento de Bioquímica

Análise, reconhecimento e clonagem virtual de ORF

Trabalho apresentado à disciplina BQ020 – Biologia Molecular do Departamento de Bioquímica do setor de Ciências Biológicas da UFPR pelos alunos Amid Tony Ibrahim e Anna Paula Cruz Garcia do curso de Engenharia de Bioprocessos e Biotecnologia.

Professor: Dr. Emanuel Maltempi de Souza

CURITIBA

2010

SUMÁRIO

1 INTRODUÇÃO 4
2 ANÁLISE DA SEQÜÊNCIA E CONSTRUÇÃO DE PLASMÍDIO VIRTUAL 6 2.1 A seqüência de DNA 5’ - 3’ a ser estudada 6 2.2 Análise da seqüência por Frame Plot 8 2.3 BLAST 9 2.3.1 ORF 1 (vermelho) 9 2.3.2 ORF2 (verde) 10 2.3.3 ORF3 (azul) 12 2.3.4 ORF4 (marrom) 13 2.3.5 ORF5 (amarelo) 14 2.4 Clustal 14 2.5 String 17 2.6 Mapa de Restrição 20 2.7 Região Promotora 21 2.8 Região Terminadora 22 2.9 Identificação do sitio de ligação do ribossomo 22 2.10 Seqüência codificante final e os motivos estruturais identificados 22 2.11 Estratégia de clonagem para expressar a proteína 22 2.11.1 Vetor escolhido para posterior clonagem e Microganismo 26 2.11.2 PCR com primers mutagênicos 28 2.11.3 Escolha da Enzima de Restrição 28 2.11.4 Desenho do primer 29 2.11.5 Montagem do Vetor 29 2.11.6 Transformação 30 2.11.7 Superexpressão e purificação 30
3 FUNÇÃO DO GENE OU OPERON Erro! Indicador não definido. 3.1 Microrganismo e importância fisiológica do produto do gene Erro! Indicador não definido. 3.2 Outros genes relevantes que podem fazer