Análise de redutase

Análise de redutase
Constitui um método para estimar o teor bacteriano do leite graças à correlação existente entre o número de bactérias presentes e o tempo de redução do azul de metileno. Em geral, o tempo de redução é inversamente proporcional ao número de bactérias presentes no leite.
O fundamento da prova baseia-se no fato das bactérias consumirem o oxigênio do leite, através de seu processo respiratório, daí resultando na redução do corante, assim quanto maior o número de bactérias presentes no leite, maior o consumo de oxigênio e mais rápido será a perda da coloração do leite.
A presença de substâncias inibidoras no leite (antibióticos) ocasiona resultados errôneos classificando como leite de excelente qualidade (pelo longo tempo de redução do corante, uma vez que o inibidor irá atuar sobre a flora presente, reduzindo-a). O teste de redutase deve ser precedido ou executado em paralelo com o teste de inibidor (para antibióticos). Material:
1. Tubos de ensaios esterilizados c/ rosca 16x150 mm;
2. Estante p/ tubos de ensaios;
3. Pipeta graduada 10 mL esterilizada;
4. Pipeta graduada de 1 mL;
5. Termômetro –10+110ºC;
6. Banho-maria regulado para 37ºC;
7. Solução de azul de metileno. Técnica:
a. Adicionar 10 mL de leite em um tubo de ensaio;
b. Aquecer os tubos em banho-maria regulado para 37ºC;
c. Adicional 1 mL de azul de metileno e inverter os tubos 3 vezes para misturar o corante e distribuir a gordura;
d. Marcar o fim da operação como o horário inicial. Resultado:
a. Fazer a 1ª observação após 30 minutos e as demais a cada 60 minutos. A cada observação os tubos que apresentarem redução (perda da cor) de 80% deverão ser registrados;
b. Após cada período de observação (30/ 60/ 60/ 60...minutos), os tubos devem ser invertidos lentamente uma única vez, e re-incubados (agitação violenta pode causar a incorporação de oxigênio e oxidação do redutor). Esta operação de inversão visa