antroquinona

SILVIA MARIA FERREIRA ALBANI

Métodos alternativos de purificação do polissacarídeo capsular de Haemophilus influenzae tipo b

Dissertação apresentada ao Programa de PósGraduação Interunidades em Biotecnologia
USP/Instituto Butantan/IPT, para obtenção do Título de Mestre em Biotecnologia.
Área de concentração: Biotecnologia
Orientador: Dr. Joaquin Cabrera-Crespo

São Paulo
2008

RESUMO
ALBANI, S.M.F. Métodos alternativos de purificação do polissacarídeo capsular de
Haemophilus influenze tipo b. 2008. 95 f. Dissertação (Mestrado em Biotecnologia) Instituto de Ciências Biomédicas, Universidade de São Paulo, 2008.
Haemophilus influenzae tipo b (Hib) é uma bactéria patogênica responsável por causar meningites, pneumonia, principalmente em crianças menores de cinco anos. A cápsula polissacarídica (PSb) é o principal fator de virulência, a qual é purificada e conjugada à proteína, e usada como vacina contra Hib. O processo clássico de purificação do PSb envolve várias etapas de precipitação com etanol e detergente catiônico (inflamável e poluente), extração com fenol (tóxico e corrosivo) e etapas de centrifugação/ultracentrifugação. O objetivo deste estudo foi melhorar o processo de purificação do PSb, substituindo total ou parcialmente o uso de etanol e/ou de centrífugas durante a purificação através de cromatografia, de digestão enzimática acoplada a sistemas de membrana de microfiltração
(MFT) e/ou ultrafiltração tangencial (UFT). O sobrenadante proveniente do cultivo fermentado e após a separação celular foi concentrado e diafiltrado em membrana de ultrafiltração tangencial de 100 kDa (UFT100). A fração concentrada foi submetida a diferentes etapas de purificação. As cromatografias de troca iônica não deram boas separações entre PSb e os contaminantes. A cromatografia de filtração em gel tem apresentado separação, mas o volume de amostra é pequeno e o fluxo muito baixo. A hidrofóbica em pH mais neutro poderia ser uma opção para