antioxidante por fosfomolibdenio

Teste da Atividade Antioxidante: Redução do fosfomolibdênio
1)Preparo de Soluções: a- Solução de Rutina, ácido ascóbico e extrato 0,2mg/ml (usar sonicador para facilitar a solubilização dos mesmos; não usar metal para fazer a pesagem)
Pesar 1 mg e diluir em 5 mL de EtOH 70% ( usar tubos Falcon) b- Solução de Fosfato de Sódio:
Pesar 551,96 mg de fosfato de sódio (monobásico) e diluir em 40 mL de água destilada. c- Solução de molibdato de amônio
Pesar 741,52 mg de molibdato de amômio e diluir em 20 mL de água destilada. d- Solução de Ácido Sulfúrico
Preparar solução de 5 mL de H2SO4 para 25 mL de água destilada.
Obs.: Deve- se preparar a solução a partir de H2SO4 estoque mais concentrada (96%); deve-se verter devagar o ácido na água.
- Mistura dos reagentes:
28 mL da solução de fosfato
12 mL de molibdato
20 mL de H2SO4
Colocar em um balão volumétrico de 100 mL e completar com água destilada até a marca de aferição.
Após o preparo da mistura, medir o pH.
2)Procedimento teste
Separar tubos de ensaio de 5 mL e tampas (o teste é feito em triplicata).
Aquecer água até 95°C.
Nos tubos identificados adicionar: 300 µL de amostra e 2 mL da mistura de reagentes.
Branco da Rutina, ácido ascórbico: 300 µL de solvente (EtOH 70%) e 2 mL da mistura de reagentes.
Branco das amostras 300 uL da amostra e 2 mL de solvente (EtOH 70%).
Fechar os tubos e levar ao banho (95°C), por 90 minutos. Se possível proteger da luz.
Ligar o espectro para estabilizar (695nm).
Após os 90 minutos, esperar amostra atingir temperatura ambiente e fazer leitura em 695 nm.

3) Interpretação dos resultados
Atividade antioxidante relativa AAR%

AAR%(ác. Ascórbico) = Abs (amostra) – Abs (branco) x 100% Abs (ác.) – Abs (branco)

AAR%(rutina) = Abs (amostra) – Abs (branco) x 100% Abs (rutina) – Abs (branco)