Extração do dna genómico e quantificação po espetrofotometria. amplificação do dna por pcr e análise por eletroforese.

trabalho Extração e quantificação, por espectrofotometria, do DNA genómico de células hepáticas de um ratinho descendente do cruzamento entre heterozigóticos relativamente ao gene Drg11 para posterior amplificação por PCR de fragmentos de DNA correspondentes ao gene supracitado e ao gene reporte LacZ e análise por eletroforese de modo a determinar o seu genótipo. Métodos • Extração e quantificação do DNA genómico 1- Escolheu-se 1 tubo (caixa a -20ºC) com uma porção de fígado de ratinho, macerou-se o tecido, o melhor possível, com um pistão de teflon e vortexou-se a solução durante 5 minutos. 2- Adicionou-se 400 l de tampão de extração (200mM Tris-HCl pH 7.5; 250mM NaCl; 25mM EDTA; 0.5% SDS; Proteinase K) e ressuspendeu-se a solução. 3- Incubou-se a solução a 65ºC durante 20 minutos no termomixer. 4- Centrifugou-se a mesma a 13000 rpm durante 5 minutos. 5- Transferiu-se o sobrenadante, contendo o DNA, para novos tubos. 6- Adicionou-se 300 l de isopropanol ao sobrenadante e inverteu-se o tubo várias vezes até visualizar os filamentos de DNA genómico. 7- Centrifugou-se a 13000 rpm durante 5 minutos. 8- Retirou-se o sobrenadante, lavou-se o “pellet” com 200 l de etanol a 70% e centrifugou-se novamente durante 2 minutos. 9- Removeu-se todo o etanol e deixou-se secar o “pellet” a 65ºC (com a tampa do tubo aberta). 10- Dissolveu-se o “pellet” de DNA em 50 l de água e incubou-se a 65ºC durante 10 minutos no termomixer. 11- Para quantificar o DNA,…

(Figura 1 - B) para posterior extração de DNA. O DNA extraído foi quantificado e o espaçador intergênico aflR-aflJ presente no DNA, juntamente com o gene da β-tubulina foram amplificados pela técnica de PCR. Subsequentemente a região amplificada foi clivada com enzimas de restrição para verificação do polimorfismo genético. Foram coletadas amostras de amendoim in natura de distintos pontos de venda escolhidos de forma aleatória no comércio de Maringá. Posteriormente as amostras…

de dois métodos de extração de DNA de material parafinado para amplificação em PCR Evaluation of two methods of DNA extraction from paraffin-embedded material for PCR amplification Primeira submissão em 17/07/06 Última submissão em 27/10/06 Aceito para publicação em 18/01/07 Publicado em 20/04/07 Luciana Estevam Simonato1, José Fernando Garcia2, Cáris Maroni Nunes3, Glauco Issamu Miyahara4 unitermos DNA Reação em cadeia da polimerase Tecido parafinado resumo Introdução:…

Extração de DNA de materiais de arquivo e fontes escassas para utilização em reação de polimerização em cadeia (PCR) Jaqueline A. BareaI; Maria Inês M. C. Pardini; Tsieko Gushiken Artigo retirado do site : www.scielo.com.br RESUMO Este trabalho visou a comparação de cinco métodos diferentes de extração de DNA de materiais de arquivo (tecidos incluídos em parafina, esfregaços de sangue periférico — corados e não corados com Leishman, lâminas com mielogramas, gotas de sangue em…

Fundamentos teórico-práticos e protocolos de extração e de amplificação de dna por meio da técnica de reação em cadeia da polimerase Empresa Brasileira de Pesquisa Agropecuária Embrapa Pecuária Sudeste Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento Fundamentos teórico-práticos e protocolos de extração e de amplificação de DNA por meio da técnica de reação em cadeia da polimerase Embrapa Pecuária Sudeste São Carlos, SP 2007 & . !" !" ' - / ! #$ ! ! #$ % $ ' (() )…

DE EXTRAÇÃO DE DNA E REALIZAÇÃO DA REAÇÃO EM CADEIA DA POLIMERASE (PCR) PARA O DIAGNÓSTICO DE Theileria equi E Babesia caballi (COMPARATIVE STUDY OF DNA EXTRACTION TECHNIQUES AND ITS USE IN THE POLYMERASE CHAIN REACTION (PCR) FOR THE DIAGNOSIS OF Theileria equi AND Babesia caballi) (ESTUDIO COMPARATIVO ENTRE TÉCNICAS DE EXTRACCIÓN DE DNA Y REALIZACIÓN DE LA REACCIÓN EN CADENA DE LA POLIMERASA (PCR) PARA EL DIAGNÓSTICO DE Theileria equi Y Babesia caballi) P. A. CANOLA*1, R. OLIVEIRA2, C.…

Extração, quantificação e amplificação de DNA Data: 02/04 Extração de DNA – Swab oral Nessa aula foi feito a coleta de amostra biológica através de swab oral, para extração do DNA. Para a extração foi utilizado o protocolo abaixo: Adicionar 200 μL de amostra biológica em tudo 1,5mL; Centrifugar a solução por 5 min., 25°C e 11000rpm; Descartar sobrenadante; Adicionar 500 μL de TE (Tris-EDTA); Centrifugar a solução por 5 min., 25°C e 11000rpm; Descartar sobrenadante; Adicionar…

(FOB / USP); professor sênior associado do Departamento de Patologia da UFF RESUMOIntrodução: O gene p53 proteína tumoral ( TP53 ) é um alvo constante de investigação na patogênese do câncer. Análise por imuno-histoquímica fornece dados limitados sobre p53 na carcinogênese oral, e TP53 seqüenciamento pode contribuir para esta análise. No entanto, a obtenção de alta qualidade e de ácido desoxirribonucléico (DNA) livre de contaminação por uma amplificação adequada pode ser uma tarefa…

RESUMO A Reação da Polimerase em Cadeia (PCR) mudou o curso da ciência e, hoje, esta técnica é tão importante que é difícil pensar em Biologia Molecular sem ela. Seu conceito básico, de amplificação de seqüências específicas dos ácidos nucléicos, tem hoje aplicações em diversos campos na odontologia, tal como, ciência forense, histopatologia, diagnóstico microbiológico, entre outras. O objetivo desta revisão é apresentar a essência da técnica de PCR, os procedimentos para a preparação…

COMUNICAÇÃO BREVE SHORT COMMUNICATION Protocolo da extração de DNA de material parafinado para análise de microssatélites em leiomioma Recebido em 23/10/02 Aceito para publicação em 10/02/03 DNA extraction from paraffin material protocol in order to analyse microssatellites in uterine leiomyoma Ericson Martins Nascimento1 Marilda Osti Spinelli1 Consuelo Junqueira Rodrigues1 Nilo Bozzini2 resumo É apresentada a padronização de protocolo de extração de DNA de material…