Extração do dna genómico e quantificação po espetrofotometria. amplificação do dna por pcr e análise por eletroforese.

trabalho Extração e quantificação, por espectrofotometria, do DNA genómico de células hepáticas de um ratinho descendente do cruzamento entre heterozigóticos relativamente ao gene Drg11 para posterior amplificação por PCR de fragmentos de DNA correspondentes ao gene supracitado e ao gene reporte LacZ e análise por eletroforese de modo a determinar o seu genótipo. Métodos • Extração e quantificação do DNA genómico 1- Escolheu-se 1 tubo (caixa a -20ºC) com uma porção de fígado de ratinho, macerou-se o tecido, o melhor possível, com um pistão de teflon e vortexou-se a solução durante 5 minutos. 2- Adicionou-se 400 l de tampão de extração (200mM Tris-HCl pH 7.5; 250mM NaCl; 25mM EDTA; 0.5% SDS; Proteinase K) e ressuspendeu-se a solução. 3- Incubou-se a solução a 65ºC durante 20 minutos no termomixer. 4- Centrifugou-se a mesma a 13000 rpm durante 5 minutos. 5- Transferiu-se o sobrenadante, contendo o DNA, para novos tubos. 6- Adicionou-se 300 l de isopropanol ao sobrenadante e inverteu-se o tubo várias vezes até visualizar os filamentos de DNA genómico. 7- Centrifugou-se a 13000 rpm durante 5 minutos. 8- Retirou-se o sobrenadante, lavou-se o “pellet” com 200 l de etanol a 70% e centrifugou-se novamente durante 2 minutos. 9- Removeu-se todo o etanol e deixou-se secar o “pellet” a 65ºC (com a tampa do tubo aberta). 10- Dissolveu-se o “pellet” de DNA em 50 l de água e incubou-se a 65ºC durante 10 minutos no termomixer. 11- Para quantificar o DNA,…

Extração de DNA de materiais de arquivo e fontes escassas para utilização em reação de polimerização em cadeia (PCR) Jaqueline A. BareaI; Maria Inês M. C. Pardini; Tsieko Gushiken Artigo retirado do site : www.scielo.com.br RESUMO Este trabalho visou a comparação de cinco métodos diferentes de extração de DNA de materiais de arquivo (tecidos incluídos em parafina, esfregaços de sangue periférico — corados e não corados com Leishman, lâminas com mielogramas, gotas de sangue em…

de dois métodos de extração de DNA de material parafinado para amplificação em PCR Evaluation of two methods of DNA extraction from paraffin-embedded material for PCR amplification Primeira submissão em 17/07/06 Última submissão em 27/10/06 Aceito para publicação em 18/01/07 Publicado em 20/04/07 Luciana Estevam Simonato1, José Fernando Garcia2, Cáris Maroni Nunes3, Glauco Issamu Miyahara4 unitermos DNA Reação em cadeia da polimerase Tecido parafinado resumo Introdução:…

UFF 8 Doutor em Patologia pela Faculdade de Odontologia de Bauru (FOB / USP); professor sênior associado do Departamento de Patologia da UFF RESUMOIntrodução: O gene p53 proteína tumoral ( TP53 ) é um alvo constante de investigação na patogênese do câncer. Análise por imuno-histoquímica fornece dados limitados sobre p53 na carcinogênese oral, e TP53 seqüenciamento pode contribuir para esta análise. No entanto, a obtenção de alta qualidade e de ácido desoxirribonucléico (DNA) livre de…

Fundamentos teórico-práticos e protocolos de extração e de amplificação de dna por meio da técnica de reação em cadeia da polimerase Empresa Brasileira de Pesquisa Agropecuária Embrapa Pecuária Sudeste Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento Fundamentos teórico-práticos e protocolos de extração e de amplificação de DNA por meio da técnica de reação em cadeia da polimerase Embrapa Pecuária Sudeste São Carlos, SP 2007 & . !" !" ' - / ! #$ ! ! #$ % $ ' (() )…

Extração, quantificação e amplificação de DNA Data: 02/04 Extração de DNA – Swab oral Nessa aula foi feito a coleta de amostra biológica através de swab oral, para extração do DNA. Para a extração foi utilizado o protocolo abaixo: Adicionar 200 μL de amostra biológica em tudo 1,5mL; Centrifugar a solução por 5 min., 25°C e 11000rpm; Descartar sobrenadante; Adicionar 500 μL de TE (Tris-EDTA); Centrifugar a solução por 5 min., 25°C e 11000rpm; Descartar sobrenadante; Adicionar…

Extração de DNA em vegetais e animal Feira de Santana 2014 1. Introdução A extração e a purificação de ácidos nucléicos a partir de diversas amostras experimentais (bactérias, fungos, tecidos vegetais e tecidos animais) é uma etapa fundamental para se obter alta eficiência de amplificação nos protocolos que usam a reação em cadeia da polimerase (PCR). Essa técnica tem sido amplamente empregada em estudos moleculares, em razão da facilidade relativa com que é…

Traço de DNA Forense: uma revisão Roland AH van Oorschot 1 , Kaye N Ballantyne 2 e R John Mitchell 3 (1) Forensic Services Department, Polícia Victoria, 31 Movimentação Forense, 3085 Macleod, Victoria, Austrália (2) Departamento de Biologia Molecular Forense, Erasmus University Medical Center, 3000 CA Roterdão, Holanda (3) Departamento de Genética da La Trobe University, 3086 Melbourne, Victoria, Austrália Roland AH van Oorschot (autor correspondente) Email:…

biologia molecular criaram a possibilidade de obter DNA de amostras teciduais estocadas em blocos de parafina, alternativa esta que permite estudos retrospectivos de grandes bancos de tecidos, contendo inúmeras doenças raras. A obtenção de macromoléculas de amostras parafinizadas, possibilita estudos de genes candidatos e estudos retrospectivos de enumeras doenças; valiosas informações clínicas são adquiridas a partir de testes de patologia molecular. A utilização dos blocos de…

ISSN 0102-6380 ESTUDO COMPARATIVO ENTRE TÉCNICAS DE EXTRAÇÃO DE DNA E REALIZAÇÃO DA REAÇÃO EM CADEIA DA POLIMERASE (PCR) PARA O DIAGNÓSTICO DE Theileria equi E Babesia caballi (COMPARATIVE STUDY OF DNA EXTRACTION TECHNIQUES AND ITS USE IN THE POLYMERASE CHAIN REACTION (PCR) FOR THE DIAGNOSIS OF Theileria equi AND Babesia caballi) (ESTUDIO COMPARATIVO ENTRE TÉCNICAS DE EXTRACCIÓN DE DNA Y REALIZACIÓN DE LA REACCIÓN EN CADENA DE LA POLIMERASA (PCR) PARA EL DIAGNÓSTICO DE Theileria equi Y…