22222

formação da unidade repetitiva Karen Hoffmann Doutoramento em: Biotecnologia Orientadora: Leonilde de Fátima Morais Moreira Provas concluídas em: 29 de Outubro de 2008 Resumo O gelano é um exopolissacárido (EPS) de elevado peso molecular produzido por Sphingomonas elodea ATCC 31461 sendo utilizado na indústria alimentar e farmacêutica. Para compreender o mecanismo de polimerização e excreção de gelano efectuou-se a análise funcional dos genes gelC, gelE e gelD. Conjuntamente, GelC/GelE são homólogas a proteínas com actividade de tirosina cinases envolvidas na determinação do tamanho das cadeias de EPS e GelD é homóloga a secretinas da membrana externa. Mutações nestes genes bloquearam a síntese de gelano. Foi demonstrado ainda que GelE liga a ATP apesar de não possuir um motivo Walker A não conservado. A importância dos resíduos de tirosina de GelE foi avaliada, tendo-se identificado o resíduo na posição 198 como essencial para a biossíntese de gelano de elevado peso molecular. A existência de uma hélice anfipática em C-terminal de GelE revelouse fundamental para a biosíntese de gelano, permitindo possivelmente a sua ligação à membrana plasmática. Estudos de interacções proteína-proteína revelaram que GelE, GelC, GelD e GelB são capazes de oligomerizar. Foram ainda identificadas interacções entre GelC-GelE-GelB e GelN-GelD, entre outras. Estes resultados indicam a existência de um complexo enzimático responsável pela polimerização/excreção de gelano, no centro do qual…